Expressão gênica da enzima urease em cepas de Sporothrix brasiliensis

Abstract

O gênero Sporothrix é composto por fungos dimórficos e é responsável por causar a esporotricose. Esta micose subcutânea de implantação traumática tem prevalência mundial e é frequentemente negligenciada. A esporotricose pode ser causada pelas seguintes espécies patogênicas: S. schenckii, S. brasiliensis, S. globosa, S. mexicana, S. chilensis, S. luriei e S. pallida. A epidemia de esporotricose observada no Brasil (principalmente no estado do Rio de Janeiro) é a maior já observada e é causada principalmente por S. brasiliensis. A urease é uma enzima que catalisa a hidrólise da ureia em amônia e carbonato. As cepas de S. brasiliensis consideradas mais virulentas produzem mais urease em meio de cultura do que aquelas consideradas menos virulentas. No entanto, ainda não foi observado seu papel funcional em nível molecular (expressão gênica). Este trabalho teve como objetivo geral padronizar reação de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) para a verificação da expressão gênica de urease em cepas de S. brasiliensis. Como objetivos específicos, buscou-se (i) avaliar a produção fenotípica de urease em cepas de S. brasiliensis; (ii) padronizar a reação de qPCR para avaliar a expressão do gene codificador para urease em cepas de S. brasiliensis e (iii) verificar a cinética de expressão de transcritos de urease em função do tempo. Os resultados obtidos demonstraram que as cepas IPEC-34910 e IPEC-16490 foram consideradas produtoras de urease em caldo de ureia de Christensen, enquanto que a cepa IPEC-654-H foi considerada não produtora. Além disso, foi possível determinar que a concentração de 10 µΜ dos primers foi a mais adequada para a realização dos testes de cinética de expressão gênica. A expressão gênica da urease foi calculada em função do gene constitutivo através da fórmula 2- ΔΔCt. A cepa IPEC-34910 exibiu cinética crescente de produção de urease através do tempo. Apesar de uma diminuição após 6h de cultivo, a produção voltou a aumentar após 9h. As cepas IPEC-16490 e IPEC-654-H apresentaram cinética decrescente de produção de urease até 6h de crescimento. Entretanto, foi observado grande aumento da produção de urease após 9h em ambas as amostras. Com base nos resultados encontrados, é possível presumir que o gene ure seja um gene constitutivo em S. brasiliensis, uma vez que sua expressão foi detectada em meio de cultivo sem ureia como fonte de nitrogênio. Contudo, para confirmar tais hipóteses, é necessário analisar uma maior quantidade de cepas em diferentes condições de cultivo.