A senescência celular é um fenômeno natural associado ao envelhecimento, podendo ser induzida pelo encurtamento dos telômeros (senescência replicativa), após múltiplas divisões celulares ou por diferentes formas de estresse (senescência prematura), como a exposição a espécies reativas de oxigênio (ERO), radiação ultravioleta (UV), quimioterapia, entre outros. O estado senescente é caracterizado pela parada do ciclo celular, expansão do tamanho celular e aumento da atividade da enzima β-galactosidase, além de uma elevada secreção de quimiocinas e citocinas pró-inflamatórias como a interleucina (IL)-6, o ligante de quimiocina 2 (CCL2, do inglês, chemokine (C-C motif) ligand 2 ) e o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF, do inglês vascular endothelial growth factor). O acúmulo de células senescentes nos tecidos contribui para o estabelecimento de uma inflamação crônica “estéril” (inflammaging), associada ao envelhecimento, que manifesta-se devido à secreção ininterrupta de mediadores pró-inflamatórios, metaloproteinases e outras moléculas sinalizadoras que, coletivamente, são denominadas fenótipo secretor associado à senescência (SASP, do inglês Senescence-associated secretory phenotype) e induzem senescência em células vizinhas. A manutenção deste estado inflamatório de forma prolongada pode contribuir para o desenvolvimento de doenças crônico-degenerativas como a artrite reumatóide, a doença de Alzheimer e o câncer. O melhor entendimento de mecanismos envolvidos no processo de senescência celular é de fundamental importância para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas que possam mitigar ou eliminar o estabelecimento destas doenças. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi padronizar e estabelecer uma técnica para a determinação de senescência celular prematura induzida por peróxido de hidrogênio em células de linhagem de fibroblastos murinos.